BIẾN NẠP GEN HbsAg TRÊN MỘT SỐ GIỐNG CÀ CHUA BI (Lycopersicon esculentum Mill.)

Ngày nhận bài: 27-07-2014

Ngày duyệt đăng: 24-09-2014

Ngày xuất bản: 06-08-2025

DOI: https://doi.org/10.31817/tckhnnvn.2014.12.7.

Lượt xem

0

Download

0

Số: Tập 12 Số 7 (2014)

Chuyên mục:

KỸ THUẬT VÀ CÔNG NGHỆ

Cách trích dẫn:

Nam, N., Hà, T., Hảo, L., Đức, L., Trí, P., Lộc, P., … Hồ, N. (2025). BIẾN NẠP GEN HbsAg TRÊN MỘT SỐ GIỐNG CÀ CHUA BI (Lycopersicon esculentum Mill.). Tạp Chí Khoa học Nông nghiệp Việt Nam, 12(7), 1005–1014. https://doi.org/10.31817/tckhnnvn.2014.12.7.

BIẾN NẠP GEN HbsAg TRÊN MỘT SỐ GIỐNG CÀ CHUA BI (Lycopersicon esculentum Mill.)

Nguyễn Thị Phương Nam 1, 2 , Trần Thị Ngọc Hà 1, 2 , Lê Hoàn Hảo 1, 2 , Lê Tấn Đức 1, 2 , Phạm Đức Trí 1, 2 , Phan Tường Lộc 1, 2 , Nguyễn Hữu Tâm 1, 2 , Bùi Minh Trí 1, 2 , Nguyễn Hữu Hồ (*) 1, 2

  • Tác giả liên hệ: [email protected]
  • 1 Viện Sinh học nhiệt đới, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam,
  • 2 Trường Đại học Nông Lâm Thành phố Hồ Chí Minh

    • Từ khóa

    Agrobacterium tumefaciens, cà chua bi (Lycopersicon esculentum Mill.), chuyển gen, gen HbsAg, lá mầm

    Tóm tắt


    Nội dung bài này đề cập một số kết quả nghiên cứu về biến nạp di truyền tạo cây mang gen HBsAg mã hóa protein vỏ virus viêm gan B trên một số giống cà chua bi như TN 412 và TN 84 phục vụ định hướng dài hạn tạo vacxin từ thực vật. Kết quả nghiên cứu tái sinh chồi từ lá mầm hai giống góp phần tạo tiền đề cho nghiên cứu biến nạp gen. Lá mầm hai giống (7 ngày tuổi) được gây nhiễm và nuôi chung với vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens mang gen HBsAg (promoter PDS + T7), gen nptII kháng kanamycin và gen gusA. Sau 2 ngày nuôi chung mô với vi khuẩn, lá mầm được rửa sạch vi khuẩn và nuôi cấy chọn lọc trên môi trường MS có bổ sung 0,5 mg/l IAA, 2 mg/l BA, 500 mg/l cefotaxime và 30 - 50 mg/l kanamycin. Qua ít nhất bốn lần cấy chuyển (15 - 20 ngày/lần) trên môi trường chọn lọc, nhiều dòng cây chuyển gen ở cả hai giống đã được thu nhận; các dòng cây chuyển gen đã được kiểm tra sự hiện diện và biểu hiện của các gen chuyển bằng kỹ thuật PCR, kỹ thuật hóa mô tế bào GUS, kỹ thuật PCR, Southern blot và Western blot. Một số cá thể T1 của một dòng cây chuyển gen T0 đã được kiểm tra sự hiện diện và biểu hiện của gen nptII bằng thử nghiệm định tính in vitro khả năng kháng kanamycin và bằng kỹ thuật PCR; tương tự, gen HBsAg ở cá thể T1 cũng đã được kiểm tra bằng kỹ thuật PCR.

    Tài liệu tham khảo

    Arntzen CJ, Lam DMK (2000). Vaccines expressed in plants. US patent # 6,136,320.

    Ausubel FM, Brent R, Kingston RE, Moore DD, Seidman JG, Smith JA, Struhl K (1987). Current Protocols in Molecular Biology, New York (USA), Green Publishing.

    Datta SK, Torrizo LB, Tu J, Oliva NP, Datta K (1997). Production and Molecular Evaluation of Transgenic Rice Plants. IRRI Discussion Paper Series, (21).

    Dellaporta SL, Wood J, Hicks JB (1983). A plant DNA minipreparation: Version II. Plant Mol.. Biol. Rep. 1(4): 19-21.

    Gamborg OL, Miller RA, Ojima K (1968). Nutrient requirement of suspensions cultures of soybean root cells. Exp. Cell Res. 50(1): 151-158.

    Gao Y, Ma Y, Li M, Cheng T, Li SW, Zhang J, Xia NS (2003). Oral immunization of animals with transgenic cherry tomatillo expressing HBsAg. World journal of Gastroenterology 9(5): 996-1002.

    Guo B, Chen Q, Guan ZJ, Tao GR, Xu LL, Hao HY, Wei YH (2012). Expression of HbsAg in tomatoes resulted in abnormal shoot regeneration in vitro. Pak. J. Bot. 44(4): 1413-1418.

    Huu Tam Nguyen, Leelavathi S, Reddy VS (2004). Bacteriophage T7 RNA polymerase-directed, inducible and tissue-specific over-expression of foreign genes in transgenic plants. Plant Biotechnology Journal 2: 301-310.

    Jefferson RA, Kavanagh TA, Bevan BW (1987). GUS fusion: -glucuronidase as a sensitive and versatile gene fusion marker in higher plants. EMBO 6: 3901-3907.

    Joung YH Youm JW, Jeon JH, Lee BC, Ryu, Hong HJ, Kim HC, Joung H, Kim HS (2004). Expression of the hepatitis B surface S and preS2 antigens in tubers of Solanum tuberosum. Plant Cell Rep, 22: 925-930.

    Kapusta J, Modelska A, Figlerowicz M, Podkowinski J, Pniewski T, Lisowa O, Berbezy P, Helias D, Biesiadka J, Femiak I, Letellier M, Yusibov V, Plucienniczak A, Koprowski H, Legocki AB (1999). Biotechnological approaches to making vaccine in plants. Plant Biotechnology and In vitro Biology in the 21st Century, A. Altman et al. (eds.), Kluwer Academic Publishers, pp. 571-574.

    Mason HS, Lam DMK, Arntzen CJ (1992). Expression of hepatitis B surface antigen in transgenic plants. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89: 11745-11749.

    May GD, Afza R, Mason HS, Wiecko A, Novak FJ, Arntzen CJ (1995). Generation of transgenic banana (Musa acuminata) plants via Agrobacterium-mediated transformation. Biotechnology, 13: 486-492.

    Murashige T, Skoog F (1962). A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures. Physiol. Plant, 15: 473-497.

    Richter LJ, Thanavala Y, Arntzen CJ, Mason HS (2000). Production of hepatitis B surface antigen in transgenic plants for oral immunization. Nature Biotechnology, 18: 1167-1171.

    Sunil Kumar GB, Ganapathi TR, Revathi CJ, Prasad KSN, Bapat VA (2003). Expression of hepatitis B surface antigen in tobacco cell suspension cultures. Prot. Exp. Purif, 32: 10-17.

    Sunil Kumar GB, Ganapathi TR, Revathi CJ, Srinivas L, Bapat VA (2005). Expression of hepatitis B surface antigen in transgenic banana plants. Planta, 222: 484-493.

    Thanavala Y, Yang YF, Lyons P, Mason HS, Arntzen CJ (1995). Immunogenicity of transgenic plant-derived hepatitis B surface antigen. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 92: 3358-3361.